1998年，主演了黑帮电影《98古惑仔之龙争虎斗》，扮演东星五虎之一的“司徒浩南”；之后又和甄楚倩主演了王晶编剧、曹建南执导的香艳版“刺马”《满清十大酷刑之赤裸凌迟》，饰演“马新贻”一角。

2002年3月28日，由刘伟强执导，刘德华、关芝琳、舒淇等主演的科幻电影《蓝血人》上映，郑浩南饰演了来自蓝血星的异类生物“Kill”。

2004年，郑浩南参演了由尹天照、万绮雯主演的爱情神话剧《我和僵尸有个约会3》，饰演乐天知足，平易近人的“人王伏羲”。

2005年，参演央视电视剧《车神》，饰演赵薇、陆毅的师傅“车神”陆川；随后，应杜琪峰邀请，客串了其执导的电影《黑社会2》，饰演“武哥”。 

2006年，主演电视剧《爱情诊所》，扮演对下属和女朋友都异常温柔的医生“狄集”。

2008年，加入杨紫琼旗下的星城娱乐，随后在吴京、方力申、卢靖珊主演的时装功夫爱情片《狼牙》中饰演国际警察余SIR。

2011年，参演了由徐子牧执导的奇幻爱情电影《无界之地》，与钟镇涛、林雪、谭耀文等分别饰演分管世界各地的区域死神；

随后与陈刚、吴毅将、孙晶晶等联手主演了电视剧《疯狂倒计时》，饰演张宝生；参演何晟铭和李晟联合主演的清宫剧《倾城绝恋》，在剧中饰演“谦王爷赛佳”。

2012年，主演了喜剧电影《潘多拉的宝剑》，饰演“左手金钱、右手美女”的钻石王老五“华哥”。

2014年，主演了由田亮、穆小勇联合制片的青春励志情感剧《骄阳似我》，郑浩南颠覆以往荧幕形象，饰演搏击教练、苦情老爸“林向海”。

2015年，郑浩南与吴镇宇、任达华、古巨基等人联袂出演了由郑保瑞监制、刘浩良执导的黑色幽默警匪片《冲锋车》，饰演小巴车“车神”林东。